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本试剂盒采用过柱纯化的方法，能够快速、温和、高效地裂解动物组织或细胞，有效提取总蛋白。本试剂盒同时提供变性和天然两种裂解液，用户可根据下游实验需求进行选择。整个提取过程仅需要1～8min，由于采用过柱纯化技术，最小可处理20μL样本与裂解液混合物，最大可达500μL，提取的蛋白溶液浓度可达2～8mg/mL，并可有效避免蛋白丢失。所提蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析。

• 操作简单快速：最快1min即可得到变性总蛋白；
  
• 无蛋白丢失：可打开DNA双链，高效获取与DNA结合的蛋白；
  
• 小样本量、高得率：最小可处理20μL样本与裂解液混合物，提取的蛋白溶液浓度可达2～8mg/mL；
  
• 适用多种实验：含有两种裂解液，既可用于提取变性蛋白质，也可提取天然蛋白质。

• 若使用本试剂盒裂解液裂解样本所得产物比较粘稠，此为正常现象；
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
  
• 本制品仅限科研使用。

• 变性总蛋白提取
  
  • 将纯化柱及收集管放在冰上预冷。
    
  • 样品处理：
    
    • 细胞样本：
      
      • 贴壁细胞：将预冷的1×PBS直接加入培养板、培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞吸去上清。按照附表中将相应体积的变性裂解液均匀地加入整个器皿表面，用移液器吹打几次。
        
      • 悬浮细胞：低速离心收集细胞，在1.5mL离心管中加入预冷的1×PBS，涡旋震荡，3000rpm离心2～3min清洗细胞。吸去多余上清，留下与细胞相同体积的PBS，涡旋震荡重悬细胞。加入附表中相应体积的变性裂解液，涡旋震荡裂解细胞。
      • 部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果。
        
      • 加入裂解液后，如果细胞裂解物太过粘稠，无法用200～1000μL吸头吹打，可将细胞裂解物直接倒入纯化柱中，进行后续操作。
    • 组织样本：将15～20mg组织放置于纯化柱上，用塑料研磨棒扭转研磨50～60次，加入200μL变性裂解液，继续研磨30～60次。如样本起始量较大或者较小，需按比例调整相应裂解液的用量。
      
      塑料研磨棒可以重复使用，请用蒸馏水彻底冲洗干净，并用纸巾擦干。
  • 离心步骤：
    
    • 细胞样本：将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中，14000～16000rpm离心30s取出。
      
    • 组织样本：盖上纯化柱盖子室温孵育1～2min，14000～16000rpm离心1～2min取出。
  • 立刻将收集管放置于冰上，弃去纯化柱，变性总蛋白提取完成。
• 天然总蛋白提取
  
  • 将天然裂解液、纯化柱及收集管放在冰上预冷。
    
  • 样品处理：
    
    • 细胞样本：
      
      • 贴壁细胞：将预冷的1×PBS直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。按照附表中将相应体积的天然裂解液均匀地加入整个器皿表面，放置于冰上孵育3～5min，用移液器吹打几次。
        
      • 悬浮细胞：低速离心收集细胞，在1.5mL离心管中加入预冷的1×PBS，涡旋震荡，3000rpm离心2～3min清洗细胞。吸去多余上清，留下与细胞相同体积的PBS，涡旋震荡重悬细胞。加入附表中相应体积的天然裂解液，涡旋震荡裂解细胞15s。将离心管放置于冰上3～5min，然后涡旋震荡10s。
      • 部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果。
        
      • 加入裂解液后，如果细胞裂解物太过粘稠，无法用200～1000μL吸头吹打，可将细胞裂解物直接倒入纯化柱中，进行后续操作。
    • 组织样本：将15～20mg组织放置于纯化柱上，用塑料研磨棒扭转研磨50～60次，加入200μL天然裂解液，继续研磨30～60次。如样本起始量较大或者较小，需按比例调整相应裂解液的用量。
      
      塑料研磨棒可以重复使用，请用蒸馏水彻底冲洗干净，并用纸巾擦干。
  • 离心步骤：
    
    • 细胞样本：将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中，14000～16000rpm离心30s取出。
      
    • 组织样本：开盖冰上孵育5min，盖上纯化柱盖子，4℃，14000～16000rpm离心1～2min取出。
  • 立刻将收集管放置于冰上，弃去纯化柱，天然总蛋白提取完成。